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    首頁 > 培訓課程 > 生物/醫學培訓 > 基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班 更新時間:2022-07-28T10:52:31

    基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班
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    基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班 已截止報名

    課程時間: 2022-09-03 09:00至 2022-09-04 18:00結束

    課程地點: 線上活動 

    主辦單位: 上海循掘生物科技中心

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          會議介紹

          會議內容 主辦方介紹


          基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班

          基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班宣傳圖

          基因編輯技術與動物模型構建研討會

          202293-4 騰訊會議網絡會議室

          網絡學習班背景

          CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期選擇壓力中形成的一種適應性免疫防御,可用來有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已經被廣泛用于基因工程,它包含Cas9,crRNA和tracrRNA,其中crRNA含有能夠識別20bp的靶向互補序列。Cas9,crRNA和tracrRNA組成復合體,識別并結合crRNA互補的序列,然后解開DNA雙鏈,Cas9中的HNH活性位點剪切crRNA的互補DNA鏈,RuvC活性位點剪切非互補鏈,最終導致DNA的雙鏈斷裂(DSB),進而實現基因的敲除和插入。

          目前,CRISPR/Cas9系統已經廣泛用于對哺乳動物細胞,細菌,斑馬魚,小鼠,豬,猴的基因編輯。本學習班將詳細講解CRISPR/Cas9基因編輯工具原理,操作流程,理論結合實踐,將讓大家詳細了解到具體如何利用CRISPR/Cas9技術構建基因修飾動物等。學習班將為相關科研工作人員和興趣愛好者提供了很好的培訓資源。


          【講師背景】

          李博士,副研究員。2014年博士畢業于德國慕尼黑工業大學大型動物生物技術研究所, 獲極優等榮譽學位(MAGNA CUM LAUDE)。主要研究領域為基因編輯動物模型構建與應用研究,成功構建過ROSA26基因定點敲入大動物模型、Kras基因點突變大動物模型、小鼠基因編輯肝癌模型等,在基因編輯研究領域積累了較好的研究知識背景,擅長對該領域知識講解和傳授,講解深入淺出、邏輯性強,并可針對性對基因編輯實際操作問題進行解答與啟發,以期更好地讓基因編輯工具應用于您的工作和學習研究中。目前已發表論文22篇,其中第一作者/并列通訊作者SCI論文12篇,以第一發明人申請國家發明專利2項。主持完成國家自然科學基金等項目6項,獲得上海市實驗動物學會2020年度學會工作先進個人、2019年 “ICLAS-CALAS國際青年獎”、2018年第三十屆上海市優秀發明選拔賽銀獎、2017年上海市人才發展資金等。


          【預期目標】
          1、掌握基因打靶與基因編輯技術(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9),能夠設計sgRNA靶點,構建CRISPR/Cas9質粒,用于基因敲除和敲入。
          2、掌握CRISPR/Cas9質粒轉染方法, 陽性細胞克隆篩選方法體系,基因編輯細胞系的建立,基因修飾情況分析方法。
          3、掌握CRISPR/Cas9脫靶產生的原因,脫靶檢測方法,降低脫靶問題的方法
          4、掌握CRISPR/Cas9的實際應用,構建動物模型,對構建基因修飾小鼠和基因修飾大動物(豬)有較深入了解。
          5、掌握新基因編輯工具,如:Cpf1, C2C2, base editing等。
          6、掌握基因編輯研究領域前沿進展,基因編輯工具的拓展應用、臨床應用等,形成利用基因編輯工具結合自己研究內容等科學思維。
          7、Base editor 使用方法。
          8、基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展

          【詳細日程

          基因編輯技術與動物模型構建研討會日程

          日期

          時間

          主題

          詳細內容

          第一天上午

          9:00-10:30

          基因修飾技術簡介

          基因打靶與基因編輯技術(ZNF, TALENs,CRISPR/Cas9)介紹

          基因編輯、基因修飾、基因打靶、轉基因、基因敲除、基因敲入等專業領域概念梳理

          CRISPR/Cas9結構和特點

          如何使用CRISPR/Cas9系統對特定基因進行敲除或定點插入(詳細方法步驟)



          拓展如何提高定點敲入效率等知識

          10:30-10:45

          休息

          10:45-12:00

          基因修飾技術簡介

          基因編輯工具Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14的結構、特點、工作原理

          如何使用Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14系統進行編輯

          Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14與Cas9的比較

          Cas9、Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14的應用和技術展望

          上午現場答疑


          12:00-13:30

          午飯及午休

          第一天下午

          13:30-14:00

          CRISPR(sgRNA)設計方法和相關網站介紹

          sgRNA設計方法和相關網站介紹

          CRISPR(sgRNA)的在線設計(在線互動設計演練)

          14:00-15:30

          基因編輯實驗詳細操作

          gRNA oligos模板退火

          退火gRNA與線性化CRISPR/Cas9載體連接

          連接產物轉化到大腸桿菌(DH5α),轉化產物涂板培養,CRISPR/Cas9重組子細菌克隆挑取,擴大化培養,鑒定陽性克隆

          細胞轉染(Electroperation,Nuclefection,Nanofection,X-fection)等介紹與應用拓展

          單細胞克隆篩選(有限稀釋法,濾紙法、環法、流式分選法等)方法介紹與應用拓展

          15:30-15:45



          15:45-17:00

          利用CRISPR/Cas9技術編輯動物細胞系

          CRISPR/Cas9質粒細胞轉染方法

          陽性細胞克隆篩選,基因修飾基因組DNA模板快速制備

          目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增,電泳檢測PCR產物

          PCR產物退火變性,T7E1酶切,電泳鑒定基因修飾情況

          17:00-17:30

          CRISPR/Cas9關鍵點總結、歸納、拓展

          基因編輯關鍵知識點歸納、總結和提煉

          CRISPR/Cas9技術應用拓展(如CAB基因敲入方法等介紹)


          第二天上午

          9:00-10:30

          利用基因編輯技術構建基因敲除或敲入小鼠

          基因工程小鼠的詳細分類與比較

          小鼠受精卵分離和培養

          CRISPR/Cas9系統顯微注射到小鼠受精卵

          受精卵顯微注射后回輸到代孕母鼠體內

          PCR和T7E1分析和鑒定基因敲除小鼠(Founder)

          基因敲除小鼠基因敲除情況分析

          CRISPR/Cas9構建基因敲除小鼠詳細實驗流程歸納和總結

          10:30-10:45

          休息

          10:45-11:15

          利用基因編輯技術構建大動物模型

          以大動物豬為例,進行詳細介紹基因編輯技術在大動物模型中的應用

          利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大型動物(豬)流程

          基因修飾大型動物優勢

          利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物(豬)模型介紹

          11:15-12:00

          利用基因編輯技術構建動物模型的詳細案例介紹

          利用CRISPR/Cas9構建基因修飾小鼠方法與相關基因修飾小鼠模型

          利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物(豬、猴)方法與相關基因修飾大動物模型

          拓展基因編輯技術在其它物種中的應用

          拓展基因編輯技術在其它物種中的應用


          12:00-13:30

          午飯及午休

          第二天下午

          13:30-15:00

          實驗結果的點評與討論

          CRISPR/Cas9載體構建討論

          目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增,電泳檢測PCR產物結果討論

          PCR產物T7E1酶切,電泳鑒定基因修飾情況結果討論

          Sanger測序鑒定基因編輯結果CRISPR/Cas9質粒陽性轉化子測序結果確認;Sanger測序閱讀基因編輯情況;如何從測序色譜圖中閱讀靶向突變等位基因型

          15:00-15:30

          CRISPR/Cas9脫靶問題分析

          脫靶產生的原因

          脫靶檢測方法

          降低脫靶問題的方法

          15:30-15:45


          15:45-16:30

          基因編輯領域進展大梳理與全面拓展

          基因編輯技術的應用拓展介紹:SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等應用于檢測方面的拓展,Base editing

          結合當下新型冠狀病毒熱點,基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展

          Cas系列突變體的介紹與應用

          基因編輯的拓展應用(如應用于杜氏營養肌不良綜合征、白內障、消滅蚊子、植物中的應用、細菌中的應用等)

          基因編輯工具的倫理問題于討論






          收費標準

          會務費用線上:2800/


          會議時間:20229月3-4

          會議地點線上:騰訊會議網絡會議室

          主辦方:上海循掘生物科技中心

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          上海循掘生物科技中心

          上海循掘生物科技中心于2020年2月21日舉辦TCGA&GEO生信高通量數據挖掘分析研討會2020(2月深圳班)會議。

          會議日程


          即將更新,敬請期待

          會議嘉賓


          即將更新,敬請期待

          參會指南

          會議門票


          票種名稱 價格 原價 票價說明
          會務費 ¥2800

          查看更多

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